熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)的好方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，成為核酸分子定量的標(biāo)準(zhǔn)方法。在做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)建議使用這些耗材：96孔光學(xué)反應(yīng)板配合光學(xué)膜，0.2ml光學(xué)八聯(lián)反應(yīng)管配合光學(xué)膜，0.2ml光學(xué)八聯(lián)反應(yīng)管配合平蓋的光學(xué)八聯(lián)管蓋等。在做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)有一些好的方法分享給大家，例如在使用單管或者8連管做實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果在樣本數(shù)量不多的時(shí)候，建議在樣品加熱塊（TRAY）上對(duì)稱(chēng)的安放樣品，并且先放在第6列或者第7列，然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來(lái)的時(shí)候不至于發(fā)生傾斜，每個(gè)反應(yīng)管的受力和受熱都比較均勻，提高了孔與孔之間的數(shù)據(jù)精密性。又例如使用96孔板做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，建議使用光學(xué)膜代替蓋子來(lái)密封反應(yīng)孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜，然后在橫向，后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機(jī)應(yīng)用示例（熒光PCR凍干）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開(kāi)發(fā)，采用正交法或響應(yīng)曲面法進(jìn)行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設(shè)計(jì)凍干曲線(xiàn)配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩(wěn)定性測(cè)試。
7. 根據(jù)穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果修正工藝或配方。
8. 整個(gè)環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。